血清蛋白电泳（SPE）描述
9382人浏览血清蛋白电泳（SPE）
蛋白质在碱性条件下带不同量的负电荷，在电场中由阴极向阳极泳动。醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶是目前最常采用的两大介质。由于白蛋白等电点的差异，电泳后由正极到负极可分为，白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五个区带，血清蛋白电泳初步了解血清白蛋白中主要组分的一种技术方法，通过血清蛋白电泳来反映肝细胞损伤程度和病变范围。也可用于反映其他疾病如肾脏疾病，风湿免疫系统疾病等。
反应性浆细胞增多症,心脏黏液瘤,微小病变型肾病,系统性红斑狼疮所致脊髓病,单克隆丙种球蛋白病伴周围神经病,小儿丘疹性肢皮炎综合征,急性间质性肺炎,抗胰蛋白酶缺乏症,复发性皮肤坏死性嗜酸粒细胞血管炎,新生儿迁延性胆汁淤积性黄疸,浆细胞瘤,黄瘤,慢性淋巴细胞性甲状腺炎
发烧,多尿,少尿,血红蛋白尿,脓尿,蛋白尿,急性肾衰竭,咳嗽,咳痰,恶心与呕吐,腹水,腹痛,腹部肿块,关节疼痛,遗尿,腹胀,蜘蛛蛊,脊柱和四肢畸形
1.空腹12小时，抽取静脉血化验，标本一定要新鲜血液。 2.化验前要告知医生近期所服用的药物以及近期的生理改变。 3.下列情况可出现生理性升高： (1)α1-球蛋白升高可见于妊娠6个月后; (2)α2-球蛋白升高可见于出生1～6个月的婴儿，妊娠4～6个月中度升高，7～9个月显著升高; (3)β-球蛋白升高见于婴儿出生后、妊娠4～6个月; (4)γ-球蛋白升高见于预防接种免疫疫苗后。
正常： 暂无相关资料 异常：1.肝脏疾病：血清白蛋白减少与γ球蛋白增加是肝病患者血清蛋白电泳的共同特征，其减少与增加的程度与肝实质损伤程度相关。 ①肝炎：急性肝炎早期或病变较轻时，电泳结果可无异常或前白蛋白减少。但随病情加重和时间延长，电泳图形可改变，白蛋白、α及β球蛋白减少，γ-球蛋白增高。传染性肝炎患者血清白蛋白轻度下降，α2球蛋白增高并伴有γ球蛋白增高；因为受损肝细胞作为自身抗原刺激淋巴系统，使γ-球蛋白增生。急性肝坏死时，白蛋白明显下降，球蛋白显著升高，出现A/G比值的倒置，提示肝功能损伤到一定程度。 ②肝硬化：血清蛋白电泳可有明显的变化，白蛋白中度或高度减少，α1、α2和β球蛋白百分比也有降低倾向，γ-球蛋白明显增加。并可出现β-γ桥，即从β区到γ区连成一片难以分开，或两区间仅见一浅凹，如同时有α1、α2-球蛋白减少，首先要考虑肝硬化。β-γ桥出现的原因系由IgA、M、G同时增加，而IgA和IgM在电泳上位于β区和γ区之间所致，肝硬化时常有多克隆免疫球蛋白升高，特别当IgA明显升高时，便使0区与y区融合一片，出现了β-γ桥。 ③肝癌：此类患者血清蛋白电泳均有改变，α1、α2-球蛋白明显增高，有时可见于白蛋白和α1-球蛋白的区带之间出现一条甲胎蛋白区带，具有诊断意义。 2.肾脏疾病：如肾病综合征时，由于尿中排出大量白蛋白而使血清中自蛋白明显下降，α2及β-球蛋白升高，γ-球蛋白减少或正常；急性肾炎时α2球蛋白可增高，有时合并γ球蛋白轻度增高；慢性肾炎可见γ-球蛋白中度升高。 3.多发性骨髓瘤和M蛋白血症如华氏巨球蛋白血症、良性单克隆免疫球蛋白增生症时血清β、γ区带处出现一特殊单克隆区带，称为M蛋白质，血清总蛋白增高。 4.炎症：急性感染可见α1或α2球蛋白增加，γ球蛋白正常;在慢性炎症或感染后期，可见γ球蛋白增加。 5.结缔组织病：系统性红斑狼疮、风湿性关节炎等自身免疫性患者可有不同程度的白蛋白下降及γ-球蛋白升高。 6.低γ球蛋白血症或无γ球蛋白血症：血清γ球蛋白极度下降或缺乏。
(1)将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其处于同一平面。 (2)醋酸纤维素薄膜的准备：取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线，做点样标记。编号，并标明正、负极后，将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡，待充分浸透后(一般为20min)取出，夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。 (3)将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样，样品应与薄膜的边缘保持一定的距离，以免电泳图谱中的蛋白区带变形，待血清渗入薄膜后，反转薄膜，使光面朝上，平直地贴于电泳槽支架上，用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通，稍待片刻。 (4)接通电源，注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极，切勿接错。电压90～150v，电流0.4～0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压，电流可能不同，应灵活掌握)，夏季通电45min，冬季通电时间稍长，约为60min，电泳区带展开约25～35mm即可。 (5)染色：通电完毕，取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min(以白蛋白区带染透为止)，然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景无色为止。 (6)定量： ①比色法：将漂洗的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2)，其余各管加3ml，振摇数次，置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度，然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。 丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠，加入量同上法。10min后，白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2)，其余各管加0.3ml，以中和部分氢氧化钠，使色泽加深，必要时离心，取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照)，然后计算各自的含量。 ②光密度计扫描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果)，将薄膜浸入透明液中2～3min，然后取出，以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡)，将此玻片竖立片刻，除去多余透明液后，置于恒温90℃至100℃的烘箱内，烘烤10～15min，取出冷却至室温，用此法透明的各蛋白区带鲜明，薄膜平整，可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明，应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易发生皱折)。B.扫描定量：将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内，进行扫描分析。
京公网安备 11010102003638号