硝基四唑氮蓝试验描述
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中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗增加，代谢中所脱的氢还原氮蓝四唑成为蓝黑色的点状或块状物，沉积于粒细胞胞质中，根据细胞内沉积颗粒判断阳性率。本试验主要用于检测中性粒细胞的胞内杀伤功能，可以用于诊断儿童慢性肉芽肿病，以及用于鉴别细菌性和病毒性感染。
(1)肝素抗凝血和NBT应用液等量混合后保温。保温方式很重要，水浴中会使NBT还原减少。 (2)计数时，凡聚集成团或破裂的中性粒细胞和单核细胞不计在内。经常有成堆的血小板黏附在中性粒细胞上，注意区别。 (3)本试验特异性不强，目前主要用于慢性肉芽肿和细菌系统感染的筛选。
正常： 正常人，一般认为10%以上者为阳性。5%～10%为NBT阴性。若NBT为阴性，则取0.5ml肝素抗凝血加10μg细菌内毒素后按上法试之，如NBT阳性细胞＞29%，表示受检者的中性粒细胞吞噬功能正常，若仍为5%～10%，则属功能异常。 异常： 暂无相关资料
取材：血液 硝基四唑氮蓝试验的测定原理：中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗骤增、糖代谢活跃、6-磷酸葡萄糖氧化脱氢成为戊糖。所脱的氢还原淡黄色的硝基蓝四氮唑（NBT）成为蓝黑色的点状或块状颗粒，沉积于中性粒细胞的胞浆中，其折光性很强，在油镜下很易识别。 试剂： （1）2.0g/L NBT生理盐水溶液：取NBT 20mg，加于10ml生理盐水中，置80℃水浴，搅拌溶解，先用滤纸过滤，再经G6除菌，分装，放4℃冰箱保存备用。试验前新鲜配制NBT应用液，取2.0g/L NBT生理盐水溶液加等量下述缓冲液，混合后即可。 （2）pH7.2 0.15mol/L磷酸葡萄糖生理盐水缓冲液：0.15mol/L Na2HPO4，70ml；0.15mol/L KH2PO4，30ml；葡萄糖100mg，混合溶解，过滤，分装，55.16kPa，高压灭菌20min，置冰箱保存。 操作方法： （1）取肝素（100u/ml）抗凝血0.1ml放入凹玻片中，加NBT应用液0.1ml和NBT应用液0.1ml，混匀。置湿盒中，37℃ 15min（其间振摇1次）再移室温15min。 （2）取1滴混合液，推成薄片，晾干。 （3）用甲醇固定3min，吹干，加10.0g/L沙黄水溶液染色5min（也可用50.0g/L甲基绿水溶液染色15min，或用姬姆萨-瑞氏染液染色），水洗，晾干。 （4）用显微镜检查，凡中性粒细胞的胞浆内含有斑点状或块状深蓝色物质沉着的为NBT阳性细胞，细胞核有不同程度的退行性变，细胞有时肿大。共计数100～200个中性粒细胞，计其NBT阳性细胞百分率。
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