免疫印迹法是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测， 具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。
进行性肌营养不良症,泌尿生殖系真菌病,老年人支原体肺炎,小儿喘息样支气管炎,小儿幽门螺杆菌感染,小儿肠系膜淋巴结结核,肺出血－肾炎综合征,丁型病毒性肝炎,巨细胞病毒感染症
不适宜人群：无 检查时禁忌：无 检查时禁忌： 1.一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。 2.显色液必须新鲜配置使用，最后加入H2O2。 3.DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。
正常： 无特殊显色反应。 异常： 异常结果：有特殊显色反应，证明有某种蛋白质存在。 需要检查人群：检查某种蛋白。
(一)蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13，000g离心15min。取上清液作为样品。 (二)电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。 (三)转移：(半干式转移) 1.电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次。 2.膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中10min。 3.转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源，恒流1mA/cm2，转移1.5hr。转移结束后，断开电源将膜取出，割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脱色，至背景清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。 (四)免疫反应： 1.用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。 2.加入包被液，平稳摇动，室温2hr。 3.弃包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。 4.加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部)，4℃ 放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。 5.弃一抗和1%BSA，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。 6.加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释)，平稳摇动，室温2hr。 7.弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。 8.加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。
京公网安备 11010102003638号